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細胞簡介：

小鼠小腦顆粒分離自小腦皮層組織；神經(jīng)元是神經(jīng)系統(tǒng)基本的結構與功能單位，小腦顆粒神經(jīng)元是體積較小的神經(jīng)元，直徑約10μm，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量非常豐富，近乎神經(jīng)元數(shù)量的一半。由于小腦神經(jīng)元的生長、分化和大腦皮層神經(jīng)元相似，而且數(shù)量多、便于取材，因此小腦顆粒神經(jīng)元是研究神經(jīng)元生長發(fā)育、神經(jīng)軸突再生及神經(jīng)疾病發(fā)生機制和臨床神經(jīng)藥理的重要手段。小腦顆粒神經(jīng)元是小腦主要的中間神經(jīng)元，在哺乳動物的小腦內(nèi)數(shù)量為豐富。顆粒神經(jīng)元的軸突與苔狀纖維和爬行纖維相聯(lián)系，形成小腦皮層內(nèi)的神經(jīng)元環(huán)路，在小腦的神經(jīng)活動中起著非常重要的作用。在動物傳染性海綿狀腦病中，病變可波及小腦顆粒神經(jīng)元，導致小腦皮層的神經(jīng)元環(huán)路受損，從而呈現(xiàn)神經(jīng)性行為失調(diào)。研究小腦顆粒神經(jīng)元在動物傳染性海綿狀腦病病理學變化中的反應、病理發(fā)生的機理特別是分子機理，有賴于小腦顆粒神經(jīng)元細胞模型的建立。小腦顆粒細胞的軸突是沿冠狀軸分布的平行纖維，正是這種排列保證了興奮的單向傳導，這是小腦功能理論中的關鍵假設，小腦顆粒細胞通過g-氨基丁酸接受戈爾吉細胞的抑制性突觸的信息傳入。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠小腦顆粒采用消化法結合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學試劑抑制法篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠小腦顆粒經(jīng)NSE免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠脯酰羧肽酶(PRCP)檢測試劑盒 ，英文名： PRCP ELISA Kit

Mouse niic oxide (NO) ELISA Kit 小鼠血清(NO)檢測試劑盒

Ratalpha-L-fucosidase,AFUELISAKit 大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGPI(Humanglucose-6-phosphateisomerase)ELISAKit人葡萄糖60酸異構酶

細胞凋亡誘導(DNA合成抑制)試劑盒20次

Rattissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

ESAM重組小鼠 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 Protein

補體1抑制因子(C1INH)重組蛋白 Recombinant Complement 1 Inhibitor (C1INH)

DCTPP1重組人 XTP3TPA / DCTPP1 蛋白 Protein

DMP1 Protein Human 重組人 DMP1 蛋白

PDGFRB Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PDGFRB / PDGFR-1 蛋白

補體1抑制因子(C1INH)重組蛋白 Recombinant Complement 1 Inhibitor (C1INH)

DMP1 Protein Human 重組人 DMP1 蛋白

ESAM重組小鼠 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 蛋白 Protein

PDGFRB Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 PDGFRB / PDGFR-1 蛋白

DCTPP1重組人 XTP3TPA / DCTPP1 蛋白 Protein

小鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human hydrocoisone (HYD) ELISA Kit 人輕化1(HYD)檢測試劑盒

Humancarbohydrate-deficieansferrin,CDTELISAKit 人糖缺失性轉鐵蛋白(CDT)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanalpha-L-fucosidase,AFU檢測試劑盒人αL巖藻糖苷酶(AFU)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物二(MDA)比色法定量檢測試劑盒50次

MonkeyMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISAKit巨噬細胞移動抑制因子(MIF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠小腦顆粒細胞小鼠核因子κB抑制蛋白α（IKB-α）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)檢測試劑盒      試劑盒   組裝/原裝

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。