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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。?

產(chǎn)品名稱：小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞

英文名稱：Mouse Testicular Mesenchymal Cells

組織來源：睪丸

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

?

小鼠睪丸間質(zhì)分離自睪丸組織；睪丸間質(zhì)成群分布在曲精小管之間，胞體呈圓形，橢圓形或不規(guī)則形，胞體較大，直徑約20μm，胞質(zhì)呈嗜酸性，細(xì)胞核呈圓形或卵圓形，常位于中央，染色較淡，有1～2個(gè)核仁線粒體多，呈管嵴狀，無分泌顆粒。從青春期開始，睪丸間質(zhì)受垂體前葉嗜堿性細(xì)胞分泌的間質(zhì)細(xì)胞刺激素（黃體生成素）的作用，能合成分泌雄性激素，可促進(jìn)的發(fā)生和男性生殖器官發(fā)育，以及維持性征和性功能。

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠睪丸間質(zhì)采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠睪丸間質(zhì)經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠睪丸間質(zhì)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

豬凋亡相關(guān)因子試劑盒   豬凋亡相關(guān)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬凋亡相關(guān)因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬凋亡相關(guān)因子試劑盒、豬凋亡相關(guān)因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬試劑盒   豬試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬試劑盒、豬eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬膽囊收縮素試劑盒   豬膽囊收縮素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬膽囊收縮素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬膽囊收縮素試劑盒、豬膽囊收縮素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒   豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O試劑盒、豬單核細(xì)胞增多性李斯特菌素Oeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA 試劑盒

Human collectin (Collectin) ELISA Kit 人膠原凝集素(Collectin)試劑盒

PorcinePulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit 豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha-SCA(HumanAlpha-sarcomericactin)ELISAKit人α橫紋肌肌動(dòng)蛋白

血液甲戊二羥酸激酶(mevalonatekinase)活性比色法定量試劑盒20次

Plaphosphatidicacid,PAELISAKit植物凝脂酸(PA)試劑盒

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白  Protein

CULLIN (Cdc53/CUL 0.5mgCULLIN (Cdc53/CUL)

NUDT2重組人 NUDT2 / Ap4A hydrolase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ANXA6 Protein Human 重組人 Annexin VI / ANXA6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CULLIN (Cdc53/CUL 0.5mgCULLIN (Cdc53/CUL)

ANXA6 Protein Human 重組人 Annexin VI / ANXA6 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CADM3重組大鼠 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白  Protein

ACVR2B Protein Mouse 重組小鼠 ACTRIIB / ACVR2B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NUDT2重組人 NUDT2 / Ap4A hydrolase 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞大鼠胱天蛋白酶7(CASP7)試劑盒 ，英文名： CASP7 ELISA Kit

Rabbit ansforming growth factor beta 2 (TGF beta 2) ELISA Kit 兔轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)試劑盒

(OC43/HKU1)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-3(HumanMaixmetalloproteinase3)ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶3

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-14)活性熒光定量試劑盒20次(10樣本)

ELISAKiBP犬醇結(jié)合蛋白

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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