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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠肝星形分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝星形細胞（HSC）又名肝貯脂細胞、貯存細胞、竇周細胞、Ito細胞等，是肝臟細胞外基質(zhì)的主要來源。HSC在激活后可進一步轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞樣細胞，各種可導致肝纖維化的因素均將HSC作為終靶細胞。正常情況下，HSC處于靜止狀態(tài)，當肝臟發(fā)生炎癥反應或受到機械刺激等損傷時，HSC的表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚?，激活?span>HSC可通過增生和分泌細胞外基質(zhì)參與肝纖維化的形成及肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建，此過程也是肝纖維化的中心環(huán)節(jié)。肝星形細胞分布于肝臟的Disse間隙內(nèi)，是合成、分泌細胞外基質(zhì)的主要來源，在肝纖維化的發(fā)生中處于重要地位。肝星形細胞是肝臟的間充質(zhì)細胞，約占肝臟細胞總數(shù)的8%-13%。作為肝臟合成細胞外基質(zhì)的主要細胞群，肝星形細胞不僅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等細胞外基質(zhì)成分，合成一定量的膠原酶以維持正常的基底膜結(jié)構(gòu)，還能通過其突起的收縮參與肝竇的微循環(huán)調(diào)節(jié)。此外，肝星形細胞能通過合成肝細胞生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子等促進肝細胞增殖和肝再生。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肝星形采用混合酶灌流消化、低速離心、密度梯度離心制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠肝星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬血管生成素2試劑盒   豬血管生成素2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬血管生成素2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬血管生成素2試劑盒、豬血管生成素2eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豬血管生成素1試劑盒   豬血管生成素1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬血管生成素1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬血管生成素1試劑盒、豬血管生成素1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豬血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒   豬血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒、豬血管內(nèi)皮細胞粘附分子1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豬血管內(nèi)皮生長因子試劑盒   豬血管內(nèi)皮生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬血管內(nèi)皮生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬血管內(nèi)皮生長因子試劑盒、豬血管內(nèi)皮生長因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

豬纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA 試劑盒

Human maix metalloproteinase 2/ gelatinase A (MMP-2/Gelatinase A) ELISA Kit 人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)試劑盒

Rabbitadramycin,ADRELISAKit 兔阿(ADR)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforai-CMVIgM(Humanai-cytomegalovirusIgMaibody)ELISAKit人抗巨細胞病毒抗體IgM

血液α-L-巖藻糖苷酶(AFU)熒光定量試劑盒20次

PorcineHeatShockProtein40,HSP-40ELISAKit豬熱休克蛋白40(HSP-40)試劑盒

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽) Protein

Cdc34 peptide 細胞周期調(diào)控因子34抗原 0.5mgCdc34 peptide 細胞周期調(diào)控因子34抗原

ADK重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

BCL6 Protein Human 重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽)

SELL Protein Mouse 重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽)

Cdc34 peptide 細胞周期調(diào)控因子34抗原 0.5mgCdc34 peptide 細胞周期調(diào)控因子34抗原

BCL6 Protein Human 重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽)

FCGR4重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽) Protein

SELL Protein Mouse 重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽)

ADK重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠肝星狀細胞大鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)試劑盒 ，英文名： Casp-8 ELISA Kit

Rabbit major histocompatibility complex class II (MHC II /RLA II) ELISA Kit 兔主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)試劑盒

人皰疹病毒6型(HHV-6)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMMP-4ELISAKit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4

體液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-13)活性熒光定量試劑盒20次(10樣本)

ELISAKitDHT犬雙氫睪同