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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

腹腔主動脈是人體的大動脈，直接延續(xù)于發(fā)自左心室的主動脈，胸腔主動脈，沿脊柱左側(cè)下行，主要負責腹腔臟器和腹壁的血液供應(yīng)。動脈發(fā)生的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌細胞能表達鈣離子通道， ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達可能是造成血管壁炎癥反應(yīng)，并進一步造成血管的原因 。因此，對動脈血管平滑肌細胞的體外培養(yǎng)和研究可用來發(fā)現(xiàn)和確定新的血管的靶向方法。

細胞特性：

1）組織來源于實驗動物的正常腹腔主動脈組織。

2)細胞鑒定：平滑肌肌動蛋白（α-SMA）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：長梭形細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代平滑肌 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠γ谷酸-半胱酸合成酶(γ-GCS)檢測試劑盒 ，英文名： γ-GCS ELISA Kit

Mouse laminin / laminin (LN) ELISA Kit 小鼠層連蛋白/板層素(LN)檢測試劑盒

ELISA 小鼠巨嗜細胞性蛋白-1(mouse MIP-1)  進口分裝

CLIAKitforIL-1sRI(Humansolubleierleukin-1receptor)ELISAkit人白介素1可溶性受體Ⅰ

通用型賴(lysine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitCH50大鼠血清總補體

IFNGR1重組食蟹猴 IFNGR / IFNGR1 蛋白 Protein

Ki-67 peptides Ki-67 Antigen(多肽抗原 0.5mgKi-67 peptides Ki-67 Antigen(多肽抗原)

FLRT1重組人 FLRT1 蛋白 Protein

ENSA Protein Human 重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白

ACPP Protein Mouse 重組小鼠 Prostatic Acid Phosphatase / ACPP 蛋白

Ki-67 peptides Ki-67 Antigen(多肽抗原 0.5mgKi-67 peptides Ki-67 Antigen(多肽抗原)

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小鼠甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat soluble cell differeiation aigen 40 Ligand (sCD40L) ELISA Kit 大鼠可溶性白細胞分化抗原40配體(sCD40L)檢測試劑盒

HumanSurfactaProteinA,SP-AELISAKit 人表面活性蛋白A(SP-A)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-gangliosideaibody,GM1檢測試劑盒人抗抗體(GM1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物可溶性酸性蔗糖轉(zhuǎn)化酶(acidinvease)活性比色法定量檢測試劑盒(液泡)20次

HumanVitaminDReceptor,VDRELISAKit人受體(VDR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠腹腔主動脈平滑肌細胞小鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T