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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡介：

小鼠脂肪干分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪干細(xì)胞（ADSCs）是一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞，主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時，身體機(jī)能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂肪干細(xì)胞具有很多優(yōu)點：①具有自我更新及多向分化的潛能；②來源充足；③對供區(qū)的創(chuàng)傷較??；④獲得率及體外擴(kuò)增速率高。脂肪干細(xì)胞是目前被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域中理想的種子細(xì)胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠脂肪干采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠脂肪干經(jīng)CD29、CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

兔子血管緊張素1型受體（AT1）試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

兔子纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒

Human aspaate aminoansferase (AST) ELISA Kit 人天門冬氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒

Humananapasticlymphomakinase,ALKELISAKit 人間變性淋巴瘤激酶(ALK)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanBrainderivedneuroophicfacor,BDNF試劑盒人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)試劑盒

植物組織可溶性總核蛋白高制備試劑盒10次

Humansquamouscellcarcinomarelatedaigen,SCCAgELISAKit人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)試劑盒

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

RGS2 peptide G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原 0.5mgRGS2 peptide G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原

REG3G重組人 REG3G / PAP1B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

GABARAP Protein Human 重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽)

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白

RGS2 peptide G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原 0.5mgRGS2 peptide G蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原

GABARAP Protein Human 重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白

REG3G重組人 REG3G / PAP1B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠脂肪干細(xì)胞大鼠雌酮(E1)試劑盒 ，英文名： E1 ELISA Kit

Mouse collagen type II (Col II) ELISA Kit 小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)試劑盒

ELISA 小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 (mouse CTLA-4)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLHELISAKit魚促黃體激素

通用型HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitGFAP神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白