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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠胰島β分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、。胰液通過(guò)胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成，胰島主要由4種細(xì)胞組成：α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細(xì)胞分泌胰島素，降低血糖；γ細(xì)胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌；PP細(xì)胞分泌胰多肽，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)、胰液分泌和膽囊收縮。胰島β細(xì)胞，即胰島B細(xì)胞，是胰島細(xì)胞的一種，屬內(nèi)分泌細(xì)胞的一種，能分泌胰島素，與胰島α細(xì)胞分泌的胰高血糖素一起起到調(diào)節(jié)血糖的作用。胰島B細(xì)胞功能受損、胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足（胰島素抵抗），會(huì)使血糖升高，從而引發(fā)糖尿病。而胰島B細(xì)胞癌變會(huì)生成胰島素瘤，引起惡性血糖降低癥狀。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胰島β采用先用膠原酶消化分離得到胰島、再用逐級(jí)消化胰島制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胰島β經(jīng)Insulin含量檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠天冬酸轉(zhuǎn)酶(AST)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： AST ELISA Kit

Mouse myelin basic protein (MBP) ELISA Kit 小鼠髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測(cè)試劑盒

Rati-iodothyronine,T3ELISAKit 大鼠三甲狀腺原(T3)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHO-1ELISAKit大鼠血紅素氧合酶1

細(xì)胞PKCγ激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKi-proBNP大鼠N端前腦素

CD99L2重組小鼠 CD99L2 / MIC2L1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter 0.5mgBad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗原

SELM重組人 SELM / Selenoprotein M 蛋白 Protein

DUSP3 Protein Human 重組人 DUSP3 / VHR 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Bad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter 0.5mgBad (BCL-xL/BCL-2-associated death promoter) 相關(guān)死亡促進(jìn)因子Bad抗原

DUSP3 Protein Human 重組人 DUSP3 / VHR 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CD99L2重組小鼠 CD99L2 / MIC2L1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SELM重組人 SELM / Selenoprotein M 蛋白 Protein

小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)ELISA 試劑盒 96T/48T

Ai endothelial cell aibodies (AECA) in rat ELISA Kit 大鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)檢測(cè)試劑盒

HumanflagellinELISAKit 人鞭毛蛋白(flagellin)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAngiotensinⅡReceptor2,AT2R檢測(cè)試劑盒人血管緊張素Ⅱ受體2(AT2R)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物甘油-3-0酸脫氫酶(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Humanβ-Thromboglobulin,β-TGELISAKit人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠胰島β細(xì)胞小鼠巰基轉(zhuǎn)移酶（GST）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠過(guò)氧化酶（GSH-Px）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠(GSH)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠谷酸脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀(guān)察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。