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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠食管成纖維分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長(zhǎng)和心肺的下降，而逐漸增長(zhǎng)。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過(guò)膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過(guò)程中，食管的上皮細(xì)胞增殖，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。食管的外膜，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，富有血管、淋巴管及神經(jīng)。主要包含食管成纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠食管成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠食管成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠食管成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2(mouse TGF-β2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠可溶性粒細(xì)胞靶受體(mouse sEM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠端粒酶(mouse Telomerase)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠Toll樣受體-2(mouse TLR-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠氧化型高密度脂蛋白(ox-HDL)試劑盒 96T/48T

Human soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1 (sPECAM-1/sCD31) ELISA Kit 人可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)試劑盒

HumanAtaxiatelangiectasiamated,ATMELISAKit 人毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)突變基因(ATM)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor12-HETE(Human20-hydroxyeicosateaenoicacid)ELISAKit人12羥二十烷四烯酸

飲料檸檬酸比色法定量試劑盒20次

MouseLactoferrin,LTF/LFELISAKit小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

NBL1重組小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 Protein

半乳糖凝集素2(GAL2)重組蛋白 Recombinant Galectin 2 (GAL2)

NRAS重組人 NRAS 蛋白 Protein

CD22 Protein Human 重組人 Siglec-2 / CD22 蛋白

CD274 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

半乳糖凝集素2(GAL2)重組蛋白 Recombinant Galectin 2 (GAL2)

CD22 Protein Human 重組人 Siglec-2 / CD22 蛋白

NBL1重組小鼠 NBL1 / DAND1 / DAN 蛋白 Protein

CD274 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

NRAS重組人 NRAS 蛋白 Protein

小鼠食管成纖維細(xì)胞大鼠多肽YY/酪酪肽(PYY)試劑盒 ，英文名： PYY ELISA Kit

Porcine hydrocoisone (HYD) ELISA Kit 豬輕化1(HYD)試劑盒

動(dòng)物源性成分(18S)核酸試劑盒 48T

CLIAKitforLy6a(Humanlymphocyteaigen6complexlocusA)ELISAKit人淋巴細(xì)胞抗原6復(fù)合物基因座A

體液總抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量試劑盒50次

ELISAKitNO雞血清

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。