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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠腮腺分離自腮腺組織；腮腺是哺乳類動物口腔中位于下頜角處的大唾液腺，位于外耳道的前下方，下頜后窩內及下頜支的深面。腮腺也是某些無尾目動物頸部有毒皮膚腺的聚集體；唾液腺有3對，腮腺、舌下腺和頜下腺，其中大的一對是腮腺。腮腺細胞是高度分化的上皮源性細胞，是一種營養(yǎng)需要復雜、在一般合成培養(yǎng)基中不易生長，體外培養(yǎng)比較困難。目前，DMEM培養(yǎng)液被認為較適于腺細胞的培養(yǎng)。加入一定量的血清更有利于細胞的生長、增殖與分化。另外，接種的細胞密度也是培養(yǎng)成功的關鍵因素之一，尤其是在腺細胞這種單層細胞培養(yǎng)時，接種的細胞總數(shù)量和生長基質表面的細胞密度對整個細胞的生長均有影響。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠腮腺采用膠原酶-聯(lián)合消化后差速貼壁，結合上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠腮腺經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產品：

大鼠糖原0酸化酶M(PYGM)檢測試劑盒 ，英文名： PYGM ELISA Kit

Mouse placea growth factor (PLGF) ELISA Kit 小鼠胎盤生長因子(PLGF)檢測試劑盒

Rat17-Hydroxyprogesterone,17-OHPELISAKit 大鼠17羥孕酮(17-OHP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforH-4(umanNeuroophin4)ELISAKIT人神經營養(yǎng)因子4

細胞PKCδ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKi-proBNP大鼠N端前腦素

FCGR2B重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein

MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉諾坦II

IL9重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

CYGB Protein Human 重組人 Cytoglobin / CYGB 蛋白

AKT3 Protein Mouse 重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標簽)

MT-II(Melanotan II Acetate 1gMT-II(Melanotan II Acetate) 醋酸美拉諾坦II

CYGB Protein Human 重組人 Cytoglobin / CYGB 蛋白

FCGR2B重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白 Protein

AKT3 Protein Mouse 重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標簽)

IL9重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白 Protein

小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA 試劑盒 試劑盒 組裝/原裝

Rat desmin (Des) ELISA Kit 大鼠結蛋白(Des)檢測試劑盒

Humancardiacisoformofopni,cELISAKit 人心肌特異性肌鈣蛋白T(c)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanadenosinedeaminase,ADA檢測試劑盒人腺苷脫氨酶(ADA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

直腸標記K-ras糞便檢測突變熒光分析試劑盒50次

Mousealpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠腮腺細胞小鼠角化細胞內分泌因子(KAF)/雙調蛋白(AR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠活化素A(ACV-A)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T