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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

小鼠毛囊分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上，附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊實(shí)際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細(xì)胞分化而來。毛囊開口起始于皮膚表面，而每個(gè)毛囊又和一個(gè)或多個(gè)腺胞相連。每個(gè)腺胞解離成富含脂質(zhì)的物質(zhì)，卻又通過一個(gè)共同和毛囊相通連的皮脂腺導(dǎo)管將分泌物運(yùn)送到皮膚表面排出。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠毛囊采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠毛囊經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡便、快速,但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。

大鼠硫氧還蛋白還原酶1(xR1)檢測試劑盒 ，英文名： xR1 ELISA Kit

Mouse proinsulin (PI) ELISA Kit 小鼠胰島素原(PI)檢測試劑盒

RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit 大鼠超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGDH/GLDH(HumanGlamatedehydrogenase)ELISAKit人谷脫氫酶

細(xì)胞元素?zé)晒舛繖z測試劑盒20次

RatsecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit大鼠分泌型0脂酶A2(sPLA2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

PDCD1重組小鼠 PD1 / PDCD1 蛋白 Protein

Cecropin 抗菌肽/天蠶素(多肽 0.5mgCecropin 抗菌肽/天蠶素(多肽)

KYNU重組人 KYNU / Kynureninase 蛋白 Protein

CTSD Protein Human 重組人 Cathepsin D / CTSD 蛋白

CD226 Protein Mouse 重組小鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

Cecropin 抗菌肽/天蠶素(多肽 0.5mgCecropin 抗菌肽/天蠶素(多肽)

CTSD Protein Human 重組人 Cathepsin D / CTSD 蛋白

PDCD1重組小鼠 PD1 / PDCD1 蛋白 Protein

CD226 Protein Mouse 重組小鼠 CD226 / DNAM-1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

KYNU重組人 KYNU / Kynureninase 蛋白 Protein

小鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human tetanus aibody (Tetanus Ab) ELISA Kit 人破傷風(fēng)抗體(Tetanus Ab)檢測試劑盒

Humanfattyacid-bindingprotein,FABPELISAKit 人脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAcetylcholinesterase,AChE檢測試劑盒人乙酰酯酶(AChE)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

正常人體腎組織S9組分(5毫克/毫升)500微升

Mouseai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit小鼠抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠毛囊細(xì)胞小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠鐵蛋白(FE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠酶2(CA-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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