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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人髂動(dòng)脈內(nèi)皮分離自髂動(dòng)脈組織；髂總動(dòng)脈位于人體的盆腔，人的髂總動(dòng)脈有兩條，也就是臨床上左右兩條分支，它是由腹部主要的動(dòng)脈演化而來(lái)，由腹部的腹主動(dòng)脈沿著人體的脊柱方向向下進(jìn)行，到達(dá)第4腰椎后開(kāi)始分成兩支，這就是左右髂總動(dòng)脈。動(dòng)脈是介于心室與毛細(xì)血管之間的管道，它接近心室的部分，管徑大，管壁較厚。經(jīng)過(guò)反復(fù)分支，管徑逐漸變小，管壁變薄，后形成與毛細(xì)血管構(gòu)造相似的毛細(xì)血管前小動(dòng)脈，與毛細(xì)血管相接。動(dòng)脈的管徑大小和管壁的厚薄，雖相差很大，但構(gòu)造上均有共同之處。一般均由3層膜組成，內(nèi)層稱(chēng)為內(nèi)膜，由內(nèi)皮及縱行排列的結(jié)締組織構(gòu)成；中間的一層稱(chēng)為中膜，由環(huán)形排列的組織構(gòu)成；外的一層叫外膜，由縱行排列的結(jié)締組織構(gòu)成。動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生。因此，動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專(zhuān)門(mén)上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人髂動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人髂動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)ELISA 試劑盒

Human urokinase type plasminogen activator (uPA/PLAU) ELISA Kit 人型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)檢測(cè)試劑盒

HumanNuclearmaixprotein22,NMP-22ELISAKit 人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

guineapigmaixmetalloproteinase9,MMP-9檢測(cè)試劑盒豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞漿可溶性總蛋白制備試劑盒20次

MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL18R1重組小鼠 IL-18R1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

C-fos(i mmediate early gene, ieg 0.5mgC-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原

CSF2重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

IL36B Protein Human 重組人 IL36B / IL1F8 蛋白

FSTL3 Protein Mouse 重組小鼠 FLRG / Fstl3 蛋白

C-fos(i mmediate early gene, ieg 0.5mgC-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原

IL36B Protein Human 重組人 IL36B / IL1F8 蛋白

IL18R1重組小鼠 IL-18R1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

FSTL3 Protein Mouse 重組小鼠 FLRG / Fstl3 蛋白

CSF2重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 Protein

豚鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CCK ELISA Kit

Human dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 人多巴胺D2受體(D2R)檢測(cè)試劑盒

Rabbitcholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit 兔子酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta-TG(RabbitBeta-Thromboglobulin)ELISAKit兔子β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白

細(xì)菌銅ATP酶(Cu++-ATPase)活性比色法量檢測(cè)試劑盒20次

rabbitInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞人周期素依賴(lài)性激酶7(CDK-7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人周期素依賴(lài)性激酶2(CDK-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人周期素依賴(lài)性激酶1(CDK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T