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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人結腸平滑肌細胞

英文名稱：Human Colonic Smooth Muscle Cells

組織來源：結腸組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

人結腸平滑肌分離自結腸組織；結腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內(nèi)。結腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結腸平滑肌細胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形、外縱行平滑肌；結腸運動少而緩慢，對刺激的反應也較遲緩。結腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運動和物質(zhì)分泌、誘發(fā)全身炎癥反應以及細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導途徑等研究中起著重要的作用。結腸平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。結腸平滑肌運動活性受到神經(jīng)遞質(zhì)、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié)。隨著現(xiàn)代胃腸動力學研究的進展，對胃腸運動的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細胞、分子水平，要求在胃腸道單個平滑肌細胞標本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學等實驗。體外培養(yǎng)細胞，由于影響因素單一，是研究細胞功能以及相應的細胞信號轉(zhuǎn)導機制的基礎。

公司實驗室分離的人結腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人結腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。

大鼠蛋白激酶N2(PKN2)檢測試劑盒 ，英文名： PKN2 ELISA Kit

Na+/H+ exchanger 3 (NHE3) ELISA Kit 人Na+/H+交換體3(NHE3)檢測試劑盒

Ratsolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAkit 大鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforCyclin-D2ELISAKit大鼠細胞周期素D2

細胞色素P450亞酶CYP2C9(CEC)活性熒光定量檢測試劑盒20次

RatFibrinogen,FbgELISAKit大鼠血纖蛋白原(Fbg)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

FIGF重組大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (Fc 標簽) Protein

ets1/E26 (E-twenty six 1 0.5mgets1/E26 (E-twenty six 1) Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗原

IL12A & IL12B重組人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

CHEK1 Protein Human 重組人 CHK1 / CHEK1 蛋白 (GST 標簽)

CTSE Protein Mouse 重組小鼠 Cathepsin E / CTSE 蛋白

ets1/E26 (E-twenty six 1 0.5mgets1/E26 (E-twenty six 1) Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗原

CHEK1 Protein Human 重組人 CHK1 / CHEK1 蛋白 (GST 標簽)

FIGF重組大鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CTSE Protein Mouse 重組小鼠 Cathepsin E / CTSE 蛋白

IL12A & IL12B重組人 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白 Protein

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human thioredoxin reductase (xR) ELISA Kit 人硫氧還蛋白還原酶(xR)檢測試劑盒

Humanindoleamine2,3-dioxygenase,IDOELISAKit 人吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenVascularEndothelialcellGrowthFactor,VEGF檢測試劑盒雞血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞TSH-BETA蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseE-SelectinELISAKit小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人結腸平滑肌細胞小鼠糖皮質(zhì)激素   英文名稱：   glucocoicoid   規(guī)格：      英文縮寫：   GC

膠質(zhì)細胞源神經(jīng)營養(yǎng)因子   英文名稱：   glial cell line-derived neuoophic factor   規(guī)格：      英文縮寫：   GDNF

小鼠生長因子   英文名稱：   growth hormone   規(guī)格：      英文縮寫：   GH

小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA3   英文名稱：   cardiac muscle anscription factor GATA3   規(guī)格：      英文縮寫：   GATA3

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用