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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人滑膜成纖維分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu)，各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎（OA）以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣?，其病理改變累及關(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用，共同加速關(guān)節(jié)的退變?；ぜ?xì)胞是構(gòu)成滑膜層的大細(xì)胞群體，是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu)，它包埋在顆粒狀無(wú)定性的基質(zhì)中，基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布?；び?span>A型（巨噬樣滑膜細(xì)胞）、B型（成纖維樣滑膜細(xì)胞）以及C型（樹(shù)突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞）細(xì)胞組成。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人滑膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠抑制素B(INHB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： INHB ELISA Kit

Mouse immunoglobulin M (IgM) ELISA Kit 小鼠免疫球蛋白M(IgM)檢測(cè)試劑盒

MouseP-SelectinELISAkit 小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanDiphtheriaaibodyELISAKit人白喉抗體

細(xì)胞Akt/PKB激酶總活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitsmActinin-α大鼠橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

酸脫氫酶α(PDHα)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Alpha (PDHa)

CBFB重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白 Protein

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

PROCR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白

酸脫氫酶α(PDHα)重組蛋白 Recombinant Pyruvate Dehydrogenase Alpha (PDHa)

F7 Protein Human 重組人 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白

VNN1重組小鼠 VNN1 / Vanin-1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

PROCR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白

CBFB重組人 CBFB / CBF-beta 蛋白 Protein

小鼠核因子κB抑制蛋白α(IKB-α)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Rat ovarian cancer marker-CA125 CA125 ELISA Kit 大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125 檢測(cè)試劑盒

humanProstaglandinD2-methoxime,PGD2-MOXELISAKIT 人甲肟前列腺素D2(PGD2-MOX)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-Nogo-Aaibody,NOGO-AAb檢測(cè)試劑盒人NOGO-A抗體(Nogo-AAb)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物酸性0酸酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

HumanUlaSensitivegrowthhormone,US-GHELISAKit人超敏生長(zhǎng)激素(US-GH)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人滑膜成纖維細(xì)胞小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T