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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人腸靜脈內(nèi)皮分離自腸靜脈；腸道指的是從胃幽門(mén)至門(mén)的消化管。腸是消化管中長(zhǎng)的一段，也是功能重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)?，形成糞便，再通過(guò)直腸經(jīng)門(mén)排出體外。腸道堪稱(chēng)身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腸靜脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腸靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA 試劑盒

People leils binding type AFP / AFP Varia 3 (AFP-L3) ELISA kit E 人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)檢測(cè)試劑盒E

Humanimmunoglobulinheavychain,IgHELISAKit 重鏈(IgH)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanE1/ubiquitin-activatingenzyme,E1/UBAE檢測(cè)試劑盒人泛素激活酶(E1/UBAE)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PAK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

humanperoxisomeproliferativeactivatedreceptorgamacoactivator1alpha,PPARGC1ELISAKit人過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

FGF1重組人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

結(jié)合球蛋白(CBG)重組蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

SMR3B重組人 SMR3B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

CDK1 Protein Human 重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

結(jié)合球蛋白(CBG)重組蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

CDK1 Protein Human 重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

FGF1重組人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

SMR3B重組人 SMR3B 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

小鼠戊糖素(Peosidine)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human Phosphoglucomase (PGM) ELISA Kit 人0酸葡萄糖變位酶(PGM)檢測(cè)試劑盒

HumanAngiotensinaseELISAKit 人血管緊張肽酶(Angiotensinase)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenIerferonγ,IFN-γ檢測(cè)試劑盒雞γ干擾素(IFN-γ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞ERBETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

Mouseglycogensyhasekinase,GSKELISAKit小鼠糖原合成酶激酶(GSK)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠纖維連結(jié)蛋白(mous FN)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine）   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠X(mouse FX)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠(mouse Fibrinogen)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀(guān)察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。