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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠子宮內膜間質分離自子宮組織；子宮是孕育胎兒的器官，位于盆腔中部，膀胱與直腸之間，其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持，這些結構受損或松弛時，可以引起子宮脫垂。子宮內膜即黏膜，由上皮（屬單層柱狀上皮，有分泌細胞和纖毛細胞二種）和固有膜（由結締組織構成，其內有大量的星形細胞，稱為基質細胞）組成，子宮內膜可分為淺表的功能膜和深部的基底層，功能層較厚，約占內膜厚度的4/5；基底層較薄較致密，約占1/5，功能層可剝脫，而基底層剝脫。子宮內膜構成雌性哺乳動物子宮壁的內層，位于子宮腔面，在動物生殖生理活動中占有重要地位。子宮和子宮內膜是維持雌性動物生理功能和生育能力的重要器官，子宮內膜的再生修復是子宮的重要生理功能。體外培養(yǎng)的子宮內膜間質細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠子宮內膜間質采用膠原酶消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠子宮內膜間質經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠子宮內膜間質體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse BDNF)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子受體(mouse BDNF R)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠骨成型蛋白-2(mouse BMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human guanine exchange factor (GEF) ELISA Kit 人鳥苷酸交換因子(GEF)試劑盒

Humanparathyroidhormonerelatedpeptide,PTHrpELISAKit 人副甲狀旁腺激素相關肽(PTHrp)試劑盒 96T/48T 進口分裝

GuineapigLebtospiraIgG試劑盒豚鼠鉤端IgG(Lebtospira)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細胞β-半乳糖苷酶活性濾膜染色試劑盒(帶濾膜)20次

MouseCalcitonin,CTELISAKit小鼠降鈣素(CT)試劑盒規(guī)格：96T/48T

ACVRL1重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

角蛋白19(KRT19)重組蛋白 Recombinant Keratin 19 (KRT19)

CLEC7A重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 Protein

CR2 Protein Human 重組人 CD21 / CR2 / C3DR 蛋白

HA Protein H7N2 重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

角蛋白19(KRT19)重組蛋白 Recombinant Keratin 19 (KRT19)

CR2 Protein Human 重組人 CD21 / CR2 / C3DR 蛋白

ACVRL1重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HA Protein H7N2 重組甲型流感 H7N2 (A/ruddy turnstone/New Jersey/563/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

CLEC7A重組人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 蛋白 Protein

大鼠子宮內膜間質細胞大鼠載脂蛋白A2(APOA2)試劑盒 ，英文名： APOA2 ELISA Kit

Mouse thioredoxin (x) ELISA Kit 小鼠硫氧化還原蛋白(x)試劑盒

MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 小鼠巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanFactorVIII-relatedAigen,FVIIIAgELISAKit人第八因子相關抗原

細胞/組織基因組/線粒體DNA同步萃取試劑盒10/20次

ELISAKitMMP-鼠基質金屬蛋白酶10