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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：大鼠牙周膜干細(xì)胞

英文名稱：Rat Periodontal Ligament Stem Cells

組織來源：牙周膜

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

大鼠牙周膜干分離自牙周膜組織；牙周膜（牙周韌帶、牙周間隙）是由致密結(jié)締組織所構(gòu)成。多數(shù)纖維排列成束，纖維的一端埋于牙骨質(zhì)內(nèi)，另一端則埋于牙槽窩骨壁里，使牙齒固位于牙槽窩內(nèi)；牙周膜內(nèi)有神經(jīng)、血管、淋巴和上皮細(xì)胞等。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于胚胎時(shí)期的中胚層組織，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景，目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞。牙周膜干細(xì)胞參與了牙周組織的病變、修復(fù)及再生過程。現(xiàn)在，利用牙周膜干細(xì)胞建立體外模型，已經(jīng)成為有關(guān)員研究牙周組織疾病的重要手段。

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙周膜干采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠牙周膜干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠牙周膜干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡便、快速,但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。

小鼠甲狀旁腺激素(PTH)試劑盒   96T/48T

小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)試劑盒   96T/48T

小鼠甲基化酶(Methylase)試劑盒   96T/48T

小鼠己糖激酶(HK)試劑盒   96T/48T

小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human prostatic acid phosphatase (PAP) ELISA Kit 人前列腺酸性0酸酶(PAP)試劑盒

HumanleukocyteaigenG,HLA-GELISAKit 人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanadrenalcoexaibody,ACA試劑盒人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物a-(a-AMYLASE)活性比色法定量試劑盒20次

Mouseadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit小鼠能a1A受體(ADRA1A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

THY1重組食蟹猴 CD90 / THY-1 蛋白 Protein

IQGAP1 支架蛋白抗原 0.5mgIQGAP1 支架蛋白抗原

DDOST重組人 DDOST / OST48 蛋白 Protein

DCBLD1 Protein Human 重組人 Discoidin / DCBLD1 蛋白

PDPN Protein Mouse 重組小鼠 Podoplanin / PDPN 蛋白

IQGAP1 支架蛋白抗原 0.5mgIQGAP1 支架蛋白抗原

DCBLD1 Protein Human 重組人 Discoidin / DCBLD1 蛋白

THY1重組食蟹猴 CD90 / THY-1 蛋白 Protein

PDPN Protein Mouse 重組小鼠 Podoplanin / PDPN 蛋白

DDOST重組人 DDOST / OST48 蛋白 Protein

大鼠牙周膜干細(xì)胞大鼠重肽神經(jīng)絲蛋白(NEFH)試劑盒 ，英文名： NEFH ELISA Kit

Mouse perinuclear ai neuophil cytoplasmic aibody (pANCA) ELISA Kit 小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)試劑盒

MouseBonemorphogeneticproteieceptorⅡ,BMPR-ⅡELISAKit 小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanInsulieceptorBeta,ISR-BetaELISAKIT人胰島素受體β

微型RNA(miRNA)擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitMIP-3β大鼠巨噬細(xì)胞性蛋白3β

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用