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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠腦膜分離自腦膜組織；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層，由外向內(nèi)為硬腦膜、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜。腦膜細(xì)胞圍繞著大腦，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細(xì)胞外基質(zhì)、組織放射狀膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)和小腦皮層分層結(jié)構(gòu)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦膜采用消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腦膜經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

中文名稱(chēng)   方法   規(guī)格

大鼠髓過(guò)氧化物酶特異性抗粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISAKit   ELISA. 

大鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISAKit   ELISA. 

大鼠(AZT)ELISAKit   ELISA.

豬白介素18(IL-18)ELISA 試劑盒

Human ai Sa aibody (ai-Sa-Ab) ELISA Kit 人抗Sa抗體(ai-Sa-Ab)試劑盒

Porcineierleukin10,IL-10ELISAKit 豬白介素10(IL-10)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAIRA(Humanai-insulieceptoraibody)ELISAKit人抗胰島素受體抗體

血液尿酸含量直接(TPTZ)比色法定量試劑盒50次

MouseUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)試劑盒

FGFR4重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白  Protein

MDM2 (urine double minute 2 0.5mgMDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗原

IL21R重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

AK4 Protein Human 重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

MDM2 (urine double minute 2 0.5mgMDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗原

AK4 Protein Human 重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白

FGFR4重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白  Protein

DDR1 Protein Mouse 重組小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

IL21R重組人 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

大鼠腦膜細(xì)胞豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA 試劑盒

Rat angiotensin conveing enzyme (ACE) ELISA Kit 大鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)試劑盒

Humanglomerularbasememembraneaibogy,GBMELISAKit 人抗腎小球基底膜抗體(GBM)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanCyclophosphamide,CTX試劑盒人環(huán)0酰胺(CTX)試劑盒

組織HCV(HEPATITISVIRUSC)病毒定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人脊髓灰質(zhì)病毒IgG(PV-IgG)試劑盒

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。