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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

膽脂瘤是一種良性鱗狀上皮角質(zhì)化增生性病變，由鱗狀層狀角質(zhì)化上皮細(xì)胞組成，它表現(xiàn)為一種含有成纖維細(xì)胞核炎性細(xì)胞的表皮囊腫，由囊內(nèi)容物、基質(zhì)、基質(zhì)外層三部分構(gòu)成。

其中，囊內(nèi)容物是由分化的角化上皮組成，基質(zhì)包括形成囊壁結(jié)構(gòu)的角化鱗狀上皮，基質(zhì)外層或固有層是膽脂瘤外周部分，由肉芽組成。中耳膽脂瘤具有過(guò)度增殖能力，炎癥可能是角質(zhì)化細(xì)胞過(guò)度增殖的原因之一。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于術(shù)后人的膽脂瘤組織。

2）細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白((Pan Cytokeratin)熒光染色為陽(yáng)性。

3）經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4）不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf原代 腫瘤 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子B(VEGFB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： VEGFB ELISA Kit

Mouse iact parathyroid hormone (i-PTH) ELISA Kit 小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)檢測(cè)試劑盒

Mousesolubleierleukin-2receptor,IL-2sRβELISAkit 小鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforhumanAzidothymidine,AZTELISAKit人

細(xì)胞EPHA3激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitPKB大鼠蛋白激酶B

SELL重組食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein

MBP (Myelin Basic Protein, Rat 0.5mgMBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠

IFNL1重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

ERN1 Protein Human 重組人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977)

APOA1 Protein Mouse 重組小鼠 ApoA1 蛋白

MBP (Myelin Basic Protein, Rat 0.5mgMBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠

ERN1 Protein Human 重組人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977)

SELL重組食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein

APOA1 Protein Mouse 重組小鼠 ApoA1 蛋白

IFNL1重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein

小鼠壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(AIL-R4)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai myocardial aibody (AMA) ELISA Kit 人抗心肌抗體(AMA)檢測(cè)試劑盒

HumanCyclophosphamide,CTXELISAKit 人對(duì)環(huán)0酰胺(CTX)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACA/CENP(HumanAicenomereAibody)ELISAKit人抗著絲點(diǎn)抗體

一步法-PCR試劑盒20/50次

MouseOsteocalcin/Boneglaprotein,OT/BGPELISAKit小鼠骨鈣素/骨谷蛋白(OT/BGP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人膽脂瘤細(xì)胞小鼠白介素 -5 (mouse IL-5)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) Biosource

小鼠白介素 -6 (mouse IL-6)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   法國(guó) Diaclone

小鼠白介素 -7(mouse IL-7)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國(guó) R&D

小鼠白介素 -10 (mouse IL-10)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   法國(guó) Diaclone

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。