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細(xì)胞簡介：

人眼結(jié)膜下囊成纖維細(xì)胞來自于眼結(jié)膜下囊組織，結(jié)膜囊由瞼結(jié)膜、球結(jié)膜和穹窿結(jié)膜所形成的潛在性囊狀腔隙，囊開口于瞼裂，眼瞼閉合即囊口的閉合。

細(xì)胞特性：

1） 組織來源于人的眼球下囊組織。

2) 細(xì)胞鑒定：波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細(xì)胞生長方式：長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠αN已?；咸擒彰?span>(αNAG)ELISA 試劑盒

Rat aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)檢測試劑盒

Humanplacealactogen,HPLELISAKit 人胎盤催乳素(HPL)檢測試劑盒 進口分裝

HumanChromogranin,CgA檢測試劑盒人嗜鉻蛋白A(CgA)檢測試劑盒

總脂肪酶(lipase)定量檢測試劑盒50次

Humansalivaryductaoaibody,SDAELISAKit人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)檢測試劑盒

ANGPTL4重組小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)

SIGLEC6重組人 SIGLEC6 / CD327 蛋白  Protein

ACVR2A Protein Human 重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL12B Protein Marmoset 重組絨猴 IL12B / IL-12B 蛋白

基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)

ACVR2A Protein Human 重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ANGPTL4重組小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL12B Protein Marmoset 重組絨猴 IL12B / IL-12B 蛋白

SIGLEC6重組人 SIGLEC6 / CD327 蛋白  Protein

植物B12(VB12)ELISA 試劑盒

Human ai somatic muscle aibody (ASA) ELISA Kit 人抗骨骼肌抗體(ASA)檢測試劑盒

PorcineVascuolarcelladhesionmolecule1,VCAM-1ELISAKit 豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAFP甲胎蛋白定量(一/二步夾心法)

血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測試劑盒20次

MouseTestoterone,TELISAKit小鼠睪同(T)檢測試劑盒

人結(jié)膜下囊成纖維細(xì)胞脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白 (FABP4)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

凋亡相關(guān)因子 (Fas/Apo-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

凋亡相關(guān)因子配體 (Fas-L)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

胎球蛋白 -A(Fetuin-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝