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細(xì)胞簡介：

乳腺癌是一種嚴(yán)重影響女性健康甚至危及生命的惡性腫瘤之一，其發(fā)展不僅是腫瘤細(xì)胞本身的作用，而且與腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)。

癌組織由實(shí)質(zhì)和間質(zhì)兩部分構(gòu)成，癌細(xì)胞構(gòu)成癌實(shí)質(zhì)，是癌的主要成分，具有組織來源特異性，癌間質(zhì)一般由結(jié)締組織和血管組成，起支持和營養(yǎng)癌實(shí)質(zhì)的作用，不具有特異性。

當(dāng)實(shí)體瘤超過 1-2mm時(shí)，需要通過新生的血管和活化的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞來獲取癌細(xì)胞生長和增殖所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。其中，癌相關(guān)成纖維細(xì)胞可通過分泌多種細(xì)胞因子和生長因子來發(fā)揮促進(jìn)癌血管生成的作用。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于人乳腺癌組織。

2)細(xì)胞鑒定：Vimentin熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：梭形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠結(jié)蛋白(Des)ELISA 試劑盒

Rat ai ypsin (AT) ELISA Kit 大鼠抗(AT)檢測試劑盒

HumanCollectinELISAKit 人膠原凝集素(Collectin)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanai-cellmembraneDNAaibody,cmDNA檢測試劑盒人抗細(xì)胞膜DNA抗體(cmDNA)檢測試劑盒

植物原生質(zhì)細(xì)胞分離試劑盒5次

Humanα-Amylase，AMS/AMYELISAKit人α(AMS/AMY)檢測試劑盒

CD5重組大鼠 CD5 蛋白  Protein

FLG(filaggrin 0.5mgFLG(filaggrin)peptide 絲聚蛋白/中間絲蛋白抗原

CD164重組人 CD164 / Endolyn 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ADM Protein Human 重組人 ADM / Adrenomedullin 蛋白

FGFR1 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 標(biāo)簽)

FLG(filaggrin 0.5mgFLG(filaggrin)peptide 絲聚蛋白/中間絲蛋白抗原

ADM Protein Human 重組人 ADM / Adrenomedullin 蛋白

CD5重組大鼠 CD5 蛋白  Protein

FGFR1 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR1 / CD331 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD164重組人 CD164 / Endolyn 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

植物玉米素(Z)檢測試劑盒

Human ai rubella virus IgG aibody (ai-RV IgG) ELISA Kit 人抗風(fēng)疹病毒IgG抗體(ai-RV IgG)檢測試劑盒

Porcinemacrophageinflammatoryprotein1α,MIP-1αELISAKit 豬巨噬細(xì)胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAGA(Humanai-gliadinaibody)ELISAKit人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體

血液糖類總量鐵比色法定量檢測試劑盒20次

Mousethyroxine,T4ELISAKit小鼠甲狀腺素(T4)檢測試劑盒

人乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞植物A檢測試劑盒   植物A試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   植物A試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物A試劑盒、植物A 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠白三烯B4檢測試劑盒   大鼠白三烯B4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠白三烯B4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠白三烯B4試劑盒、大鼠白三烯B4 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠金屬硫蛋白檢測試劑盒   大鼠金屬硫蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠金屬硫蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠金屬硫蛋白試劑盒、大鼠金屬硫蛋白檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠白三烯C4檢測試劑盒   大鼠白三烯C4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   大鼠白三烯C4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：大鼠白三烯C4試劑盒、大鼠白三烯C4 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。