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　　由于庚肝抗體IgM檢測試劑盒保存的特殊性，使得不少的操作者對冷凍后的產(chǎn)品產(chǎn)生了疑問：ELISA檢測試劑盒被冷凍后再使用有影響嗎？對此，我司ELISA檢測試劑盒技術(shù)員建議ELISA試劑盒解凍后一次用完，并作出解釋：

　　ELISA檢測試劑盒的保質(zhì)期一般都是在一年，如果保存得當(dāng)?shù)脑挘粫?huì)出現(xiàn)問題的。但不要反復(fù)凍融。當(dāng)然如果是正常的ELISA試劑盒，應(yīng)該放在4℃左右冰箱保存。

　　但要注意的是，如果將試劑盒剛從冰箱里面拿出來就立即使用的話，可能會(huì)影響，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。建議：先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在ELISA檢測試劑盒使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。

　　已開封或者使用后，剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存，ELISA檢測試劑盒開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

　　庚肝抗體IgM檢測試劑盒操作步驟

　　1.包被過程(注意設(shè)置空白對照，陰性對照)：

　　將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當(dāng)濃度(一般所需抗原包被量為每孔20-200μg)，每孔抗原加入100μl，置37℃，4h，或4℃，24h;棄去孔中液體.(為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋或?qū)迤椒旁诘撞坑袧窦啿嫉慕饘贊窈兄?。

　　2.封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔：

　　5%小牛血清置37℃封閉40min，封閉時(shí)將封閉液加滿各反應(yīng)孔，并去除各孔中的氣泡，封閉結(jié)束后用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3min。

　　洗滌方法：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，將洗滌液注滿板孔，放置2min略作搖動(dòng)，吸干孔內(nèi)液，傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌次數(shù)3次

　　3.加入待檢測樣品(建立合適的濃度梯度)：

　　檢測時(shí)一般采用1：50-1：400的稀釋度，應(yīng)采用較大稀釋體積進(jìn)行，一般保證樣品吸取量>20μl。

　　將稀釋好的樣品加入酶標(biāo)反應(yīng)孔中，每樣品至少加雙孔，每孔100μl，置于37℃，40-60min.用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3min。

　　4.加入酶標(biāo)抗體：

　　酶標(biāo)抗體：根據(jù)酶結(jié)合物提供商提供的參考工作稀釋度進(jìn)行，37℃，30-60min之間，短于30min往往結(jié)果不穩(wěn)定.每孔加100μl.洗滌同前。

　　5.加入底物液(現(xiàn)用現(xiàn)配)：

　　選TMB-過氧化氫尿素溶液，OPD-過氧化氫底物液系統(tǒng)次之。

　　底物加入量：每孔100μl，置37℃避光放置3-5分鐘，加入終止液顯色。

　　6.終止反應(yīng)：

　　每孔加入終止液50μl終止反應(yīng)，于20min內(nèi)測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　7.結(jié)果判斷：

　　庚肝抗體IgM檢測試劑盒OPD顯色后采用492nm波長，TMB反應(yīng)產(chǎn)物檢測需要450nm波長。檢測時(shí)一定要首先進(jìn)行空白孔系統(tǒng)調(diào)零，用測定標(biāo)本孔的吸收值與一組陰性標(biāo)本測定孔平均值的比值(P/N)表示，當(dāng)P/N大于2時(shí)作為抗體的效價(jià)。(數(shù)值的大小依具體檢測要求而定)