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1.雙抗體夾心法測(cè)抗原

    一種借助酶免疫或放射免疫法檢測(cè)抗原的技術(shù)。即以已知抗體包被固相載體，相繼加入待測(cè)抗原和酶(或核素)標(biāo)記的抗體，從而形成三明治樣雙抗體夾心。

雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原（臨床檢測(cè)蛋白質(zhì)等大分子抗原）zui常用的方法，操作步驟如下：

1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。

2）加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。

3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。

4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。

2.間接法測(cè)抗體

    間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗抗體）以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。操作步驟如下：

1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

2）加稀釋的受檢血清，保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。

3）加酶標(biāo)抗抗體。可用酶標(biāo)抗人Ig以檢測(cè)總抗體，但一般多用酶標(biāo)抗人IgG檢測(cè)IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體結(jié)合，從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。

4）加底物顯色。

3.競爭法測(cè)抗體

    當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。

4.競爭法測(cè)抗原

    小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競爭法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（酶標(biāo)板）；

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（酶結(jié)合物）；

（3）底物；

（4）陰性對(duì)照品和陽性校準(zhǔn)品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；

（5）抗體及標(biāo)本的稀釋液；

（6）洗滌液；

（7）反應(yīng)終止液。

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